槲皮素通过小分子核糖核酸196b调节磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路从而抑制骨肉瘤细胞增殖研究

作者：李东泽; 吴良邦^*

来源：中国中医骨伤科杂志, 2023, 31(06): 8-14.

DOI：10.20085/j.cnki.issn1005-0205.230602

• 槲皮素
• 骨肉瘤细胞
• 小分子核糖核酸196b
• 磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路

目的:探讨槲皮素抗骨肉瘤细胞增殖的可能机制。方法:体外培养骨肉瘤细胞系MG-63、143B和U2OS,用25,50和100μmol/L的槲皮素干预后，通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小分子核糖核酸196b(miR-196b)的水平。随后利用miR-196b抑制剂，联用100μmol/L槲皮素后通过CCK8检测细胞的存活率；通过划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭；通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的表达。结果:槲皮素上调了三种骨肉瘤细胞中miR-196b的水平，且呈现剂量依赖性。在应用miR-196b抑制剂后，miR-196b的表达水平被显著抑制。槲皮素能够显著抑制骨肉瘤细胞的生长，但在联用miR-196b抑制剂后，槲皮素抑制骨肉瘤细胞增殖的作用被减弱。划痕和Transwell实验结果显示，槲皮素能够显著抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭，但在联用miR-196b抑制剂后，槲皮素抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭的作用被减弱。此外，槲皮素显著抑制了骨肉瘤细胞中p-mTOR、p-AKT和p-PI3K的表达，对mTOR、AKT和PI3K的表达则无明显影响。联用miR-196b抑制剂后，p-mTOR、p-AKT和p-PI3K的表达显著上升，与单用槲皮素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素通过上调miR-196b调节PI3K/AKT/mTOR信号通路，从而抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。