MALDI-TOF-MS高灵敏度分析EGFR基因多位点突变方法的建立与应用

作者：黄海燕; 孙杰; 徐炜新; 王姜琳; 孙亚蒙; 汪国庆; 叶绍云; 蒋峻峰; 聂芳芳; 徐军; 王纯^*

来源：检验医学与临床, 2023, 20(03): 334-338.

• MALDI-TOF-MS
• ddPCR
• EGFR基因
• 液态活检

目的 以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为分析平台，建立表皮生长因子受体(EGFR)基因多位点突变的高灵敏度同步检测方法，用于辅助临床伴随诊断。方法 使用MALDI-TOF-MS推荐的网站设计引物和单碱基延伸引物(UEP),设计添加针对野生型基因组的blocker,以减少野生型模板对突变位点检测的干扰。用数字PCR定量标准品，使用定量后的标准品验证检测体系的灵敏度。收集228例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的血液标本，比较MALDI-TOF-MS平台与微滴式数字PCR(ddPCR)平台检测结果的特异度、灵敏度。结果 MALDI-TOF-MS检测E746＿A750del位点、T790M位点突变灵敏度达0.1%,最小突变检出拷贝数达2.8;L858R位点突变灵敏度达0.5%,最小突变检出拷贝数达12。与ddPCR检测相比，MALDI-TOF-MS检测E746＿A750del、L858R和T790M位点的灵敏度、特异度、Kappa值分别为94.4%(34/36)、99.5%(191/192)、0.95,94.6%(35/37)、100.0%(191/191)、0.97,83.3%(15/18)、99.5%(209/210)、0.87。结论 MALDI-TOF-MS建立的检测方法具有很高的灵敏度，与ddPCR检测具有非常高的一致性，有广阔的临床应用前景。

• 单位
  上海健康医学院