微小RNA-30c-2-3p在缺氧预处理心肌细胞保护中的作用

作者：李瑞萍; 薛富善^*; 杨桂珍; 刘亚洋; 李慧娴; 廖旭

来源：国际麻醉学与复苏杂志, 2019, (02): 98-102.

• 缺氧预处理
• 心肌保护
• 微小RNA
• 微小RNA-30c-2-3p
• 内质网应激

目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30c-2-3p在心肌细胞缺氧预处理心肌保护中的作用。方法 新生SPF级大鼠心肌细胞培养72 h后,接种于6孔板中,密度为5×105个/ml,按随机数字表法分为3组(每组72个培养孔,检测各指标时每组取6孔,重复3次)：对照组(Sham组)、缺氧/复氧组(AR组)和缺氧预处理组(PAR组)。Sham组心肌细胞正常培养,AR组心肌细胞进行缺氧3 h/复氧6 h处理,PAR组心肌细胞在进行缺氧3 h/复氧6 h处理前行缺氧30 min/复氧30 min单循环处理。复氧6 h后,各组采用比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR (real-time PCR)法检测miRNA-30c-2-3p和X-box结合蛋白-1(X-box binding protein-1, XBP1)mRNA表达水平,Western blot法检测XBP1s(内质网应激后,XBP1剪接后翻译成具有转录调节活性的XBP1)和免疫球蛋白结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BiP)表达情况。采用双荧光素酶基因报告实验验证miRNA-30c-2-3p和XBP1的靶向关系。结果 与Sham组比较,AR组和PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率升高,miRNA-30c-2-3p、XBP1 mRNA和XBP1s、BiP表达升高(P<0.05)。与AR组比较,PAR组心肌细胞LDH漏出率和细胞凋亡率降低,miRNA-30c-2-3p表达降低,XBP1 mRNA和XBP1s、BIP表达升高(P<0.05)。双荧光素酶基因报告结果证实XBP1为miRNA-30c-2-3p的靶基因。结论 缺氧预处理可能是通过低表达miRNA-30c-2-3p进而增加XBP1s表达而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,BiP可能是XBP1产生心肌保护效应的下游因子之一。

• 单位
  北京协和医学院; 首都医科大学附属北京友谊医院; 中国医学科学院