金黄色葡萄球菌肠毒素C3过表达慢病毒载体的构建及鉴定

作者：谢益欣; 王敏; 李先平; 杨敏; 李碰玲; 张婷婷; 宋欢; 董智慧; 唐爱国

来源：中国免疫学杂志, 2016, 32(09): 1323-1332.

DOI：10.3969/j.issn.1000-484X.2016.09.017

• 金黄色葡萄球菌肠毒素C3
• 慢病毒
• 载体构建
• 过表达

目的:构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增SEC3基因片段;用Age I酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;转染293T细胞包装慢病毒,观察细胞荧光及Western blot检测慢病毒载体表达,HIV-1 p24 ELISA法测定慢病毒载体滴度。结果:获得目的基因,并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体,通过PCR及DNA测序鉴定,证明GV365-SEC3质粒构建正确;转染293T细胞后可观察到大量荧光细胞,经蛋白电泳得到29 k D大小的蛋白条带,与目的基因蛋白相符合,ELISA检测病毒载体滴度为5×108TU/ml。结论:成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体,为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。

• 单位
  中南大学湘雅二医院; 中南大学湘雅医学院