以合成肽为抗原检测PRRSV抗体ELISA方法的建立及初步应用

作者：孙见^*

来源：中国动物传染病学报, 2022, 30(04): 190-196.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20220530.002

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• N蛋白
• 抗原表位
• 合成肽

通过软件预测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的主要抗原性表位，利用化学合成的方法合成三条针对N蛋白抗原表位的多肽作为包被抗原，筛选最优的一条建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该ELISA方法的最适条件为：以2.5 μg/mL的合成肽(Pep3)包被酶标板，4℃过夜，不需封闭，阴阳性血清分别稀释200倍，37℃ 作用60 min，辣根过氧化酶(HRP)标记兔抗猪酶标二抗1000倍稀释，37℃作用30 min，TMB 37℃显色15 min，2 mol/L H2SO4终止反应，酶标仪A(450 nm)读数。利用所建立的方法测定50份阴性血清的值计算S/P值，求得当S/P值≥0.324时，即为阳性，0.324>样品S/P值>0.212即为可疑，S/P值≤0.212时，即为阴性。之后进行了灵敏度试验，将标准阳性血清进行1∶3200倍稀释仍然呈现阳性，说明该检测方法具有较高的灵敏性；与常见的PCV2、CSFV、PRV、SIV 4种猪疫病阳性血清无交叉反应，说明该检测方法具有较高的特异性；通过对临床的200份样品进行检测，与IDEXX-PRRSV抗体检测试剂盒相比较，符合率达91.4%，说明该校测方法具有较高的符合率。本研究建立的ELISA方法对于PRRSV的常规诊断及流行病学调查具有重要意义。

• 单位
  威海海洋职业学院; 中国农业科学院特产研究所