穿心莲内酯通过Hippo通路调控伊立替康对结肠癌HT-29细胞凋亡及TOPO-1表达影响

作者：于剑; 李佳锜; 周怡婷; 臧玉强; 礼巍^*; 姜媛^*

来源：临床军医杂志, 2020, 48(11): 1332-1337.

DOI：10.16680/j.1671-3826.2020.11.25

• 穿心莲内酯
• 伊立替康
• Hippo通路
• 合成致死

目的探讨穿心莲内酯及伊立替康对结肠癌细胞的联合致死作用,寻找低毒高效治疗结肠癌的方法。方法运用二代测序技术,检测穿心莲内酯对结肠癌细胞作用的基因组学改变情况;运用KEGG及GO进行功能学富集;根据测序结果于TCGA数据库比对穿心莲内酯作用靶点;MTT法检测细胞增殖情况;运用免疫荧光素法检测HT-29细胞TOPO-1活性;Western Blot法检测Bax、BCL-2、YAP-1、TOPO-1表达。结果穿心莲20μmol/L处理24 h后提取DNA,DNA质检合格后Hiseq测序,基于参考基因组比对,进行可变剪接预测分析以及新转录本的发掘,发掘新转录本60 722个。测序结果GO及KEGG富集,提示穿心莲内酯调控Hippo通路。TCGA数据库比对,Hippo通路关键基因YAP1表达与TOPO-1表达呈正相关(r=0.45,P=3.6e-15)。MTT法提示穿心莲内酯与SN-38(伊立替康体内活性物质)具有合成致死作用。Western Blot法检测YAP、TOPO-1、BCL-2表达下调,同时促凋亡Bax升高。免疫荧光法提示穿心莲内酯联合SN-38能显著降低TOPO-1活性。结论穿心莲内酯及TOPO-1抑制剂作为治疗策略的组合疗法,可以提高药物效率以及结肠癌细胞对Hippo通路驱动的癌症中化疗的敏感性,为穿心莲内酯临床运用提供基础理论。

• 单位
  大连大学附属新华医院; 大连大学附属中山医院