鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作者：陈延飞; 覃尧; 李夏莹; 王永强; 李晓齐; 曹红; 郑世军

来源：中国兽医杂志, 2015, 51(04): 3-9.

• 鸡传染性贫血病毒
• VP2蛋白
• 原核表达
• 单克隆抗体

为制备CIAV VP2单克隆抗体,将原核表达的His-VP2融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-VP2融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌抗CIAV VP2蛋白的杂交瘤细胞克隆,分别命名为3D7、3B8、2D3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价分别为1:8.0×105、1:4.0×105,以及1:6.4×106,亲和力解离常数分别为7.34×10-11、2.65×10-11,以及2.98×10-11。IgG亚类分别为IgG1、IgG2b以及IgG2b。经Western Blot试验证明,3D7株单抗能特异地识别CIAV VP2蛋白,其识别的抗原表位区域为VP2 N-端的2040 aa。经IFA试验证明,3株单抗均能识别天然的CIAVVP2蛋白。此单抗为研究CIAVVP2的生物学功能和CIAV致病机理奠定基础。

• 单位
  中国农业大学; 农业生物技术国家重点实验室