牛流行热病毒山东分离株α3基因序列分析及原核表达与纯化

作者：朱鸿超; 何畅; 侯佩莉; 王洪梅; 李雪漫; 唐文娟; 何洪彬^*

来源：山东农业科学, 2021, 53(07): 107-112.

DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2021.07.018

• 牛流行热病毒(BEFV)
• α3蛋白
• 序列分析
• 原核表达
• 纯化

为深入研究牛流行热病毒(BEFV)编码的α3非结构蛋白的功能及其在研发新型BEFV疫苗和诊断试剂上的应用,本研究对本实验室分离保存的BEFV采用RT-PCR法对其α3基因进行扩增;用DNAStar软件对序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析;用ProtParam和抗原表位分析生物信息学软件研究α3蛋白的亲水性、优势抗原表位区;分别用限制性内切酶双酶切目的基因α3和pGEX-4T-1载体,构建pGEX-4T-1-α3原核表达载体,并进行诱导表达。结果表明,成功扩增出156 bp的α3基因序列;该α3基因序列与参考毒株的核苷酸序列同源性为98.0%～100.0%,氨基酸序列的同源性也为98.0%～100.0%,表明α3蛋白具有较高的保守性;BEFV的α3蛋白抗原表位分析表明3～5、9～47 aa是α3蛋白的优势抗原表位区段,总平均疏水性为-0.737,说明该蛋白以可溶性形式存在;构建的pGEX-4T-1-α3原核表达质粒在大肠杆菌中成功表达,应用可溶性蛋白纯化的方法获得较高纯度的α3蛋白。本研究为该蛋白的免疫原性验证以及新型牛流行热病毒疫苗研发提供了数据参考。

• 单位
  生命科学学院; 山东师范大学; 山东师范大学附属中学