SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法的建立及验证

作者：程小玲; 施金荣; 张雪婷; 申瑷琳; 何婧雯; 程尧; 段凯^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(07): 839-843.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003949

• SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)
• 宿主细胞DNA残留
• 荧光定量PCR

目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法，并进行验证，以期更好地控制产品安全性。方法 通过磁珠法对SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)原液进行DNA提取，采用探针型PCR对宿主细胞DNA残留量进行定量分析。对建立的方法进行线性范围、重复性、中间精密度、定量限、专属性、耐用性、准确度验证，并使用该方法对5批SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)进行宿主细胞DNA残留量检测。结果 DNA标准曲线在300～0.003 pg/μL范围内线性良好(R2均≥0.99)；重复性和中间精密度验证相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<20%；定量限为0.001 pg/μL；样品稀释液与纯化液稀释液对检测无干扰；样品于53、55、57℃条件下孵育60 min及55℃条件下孵育56、60、64 min的检测结果无明显差异；准确度验证回收率在79%～83%,RSD <5%。用该方法检测SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)原液中DNA残留量适应性良好。结论 成功建立了SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量荧光定量PCR检测方法，该方法线性范围、重复性、中间精密度、定量限、专属性、耐用性和准确度均符合可接受标准，适用于SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞DNA残留量的检测及质量控制。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司