类风湿关节炎患者Ⅱ型胶原蛋白cDNA基因的克隆及序列分析

作者：王安宇; 魏良纲; 乔艺杰; 张超; 张定安; 何光志

来源：山东医药, 2012, (42): 15-17.

• 类风湿关节炎
• Ⅱ型胶原蛋白cDNA
• 基因克隆
• 基因序列 rheumatoid arthritis
• cDNA of type Ⅱcollagen
• gene clone
• gene sequence

目的克隆人Ⅱ型胶原蛋白cDNA(hCⅡcDNA)基因。方法以类风湿关节炎患者关节软骨组织的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hCⅡcDNA基因,将扩增产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,在LB培养基中培养12～16 h,挑取菌落并接种于LB培养液中,取2μL菌液为模板进行PCR鉴定,PCR结果呈现特异性条带为hCⅡcDNA阳性。对hCⅡcDNA阳性的克隆菌株进行测序。结果克隆基因经测序并通过NCBI BLAST分析后发现,其与Genebank中公布的编码人Ⅱ型胶原蛋白的基因序列(NM_001844)同源性达99%。结论成功克隆出了hCⅡcDNA基因。

• 单位
  贵阳中医学院第二附属医院; 贵州中医药大学