DNMT3b表达与SEPT9基因甲基化在结直肠癌发生进程中的相关性

作者：贺娜; 冯巩; 窦建华; 唐光波; 钱美睿; 陈玲; 吴开春^*

来源：中华肿瘤杂志, 2020, 42(11).

• 结直肠肿瘤
• 高级别上皮内瘤变
• SEPT9
• 甲基化
• DNA甲基转移酶3b
• 癌前病变

目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)表达与SEPT9基因甲基化的关系, 以及二者在结直肠癌诊治中的应用前景。方法收集75例结直肠癌及癌旁组织、68例结直肠高级别内瘤变组织(简称癌前病变组织)和高级别内瘤变旁组织(简称癌前病变旁组织), 采用焦磷酸测序检测SETP9基因甲基化水平, 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测SEPT9 mRNA的表达, 采用免疫组化方法检测SETP9和DNMT3b的蛋白表达。采用脂质体介导法, 将DNMT3b siRNA和阴性对照siRNA转染HT-29细胞, 设DNMT3b siRNA 15 nmol/L组、DNMT3b siRNA 30 nmol/L组、阴性对照siRNA 15 nmol/L组、阴性对照siRNA 30 nmol/L组和空白对照组。采用焦磷酸测序检测各组SEPT9基因甲基化和DNMT3b mRNA表达水平。结果结直肠癌组织、癌旁组织、癌前病变组织和癌前病变旁组织中, SEPT9基因甲基化率分别为(76.8±6.5)%、(14.4±2.6)%、(34.6±5.0)%和(7.4±1.2)%, 结直肠癌组织最高(P<0.001);SEPT9mRNA的相对表达量分别为0.18±0.03、0.89±0.41、0.69±0.41和1.01±0.21, 结直肠癌组织最低(P<0.001), 而癌旁组织、癌前病变组织及癌前病变旁组织差异无统计学意义(P>0.05);SEPT9蛋白表达阳性率分别为12.0%(9/75)、53.3%(40/75)、55.1%(38/69)和62.3%(43/69), 结直肠癌组最低(P<0.001), 而癌旁组、癌前病变组及癌前病变旁组差异无统计学意义(P>0.016 7);DNMT3b蛋白表达阳性率分别为56.3%(45/75)、26.7%(20/75)、46.4%(32/69)和33.3%(23/69), 结直肠癌组最高(P<0.001), 但与癌前病变组差异无统计学意义(P>0.016 7)。体外实验显示, 空白对照组、阴性对照siRNA 15 nmol/L组、阴性对照siRNA 30 nmol/L组、DNMT3b siRNA 15 nmol/L组和DNMT3b siRNA 30 nmol/L组中, DNMT3b siRNA 30 nmol/L组DNMT3b mRNA表达量最低, 与其他各组差异均有统计学意义(均P<0.05), SEPT9基因甲基化率最低, 但与DNMT3b siRNA 15 nmol/L组差异无统计学意义(P>0.05)。结论在结直肠癌病变进程的不同阶段, DNMT3b的表达与SEPT9基因甲基化水平有明显的相关性, DNMT3b高表达可能是SEPT9基因甲基化前重要的分子事件, 在结直肠癌早期病变诊治中具有重要的潜在应用价值。

• 单位
  西安医学院第一附属医院; 肿瘤生物学国家重点实验室; 中国人民解放军空军军医大学