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摘要
目的建立人参花和三七花的多重位点特异性PCR鉴别方法。方法通过分析人参花与三七花的ITS序列,寻找SNP差异位点设计特异性引物,对人参花和三七花进行鉴别。本研究对退火温度、反应循环数、引物量、DNA模板量、Taq酶等关键因素进行了考察,优化反应体系条件,并对所建方法进行方法学考察并测定掺杂检出限。结果通过对PCR反应条件进行优化,在退火温度为60℃,循环次数30次时,人参花在250bp处有一条特异性条带,三七花在500bp处有一条特异性条带,且人参花中掺杂三七花的检出限为10%,三七花中掺杂人参花的检出限为0.5%。结论本研究所建方法专属性强,结果准确,耐用性好,可以快速鉴别并判断是否有掺杂情况,为人参花和三七花的质量控制提供了一种可靠的检测方法。
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