基于蛋白组学探讨消癌解毒方通过IL-6/TNF-α/STAT3通路抑制肝癌小鼠肿瘤生长的作用机制

作者：孙玉侠; 吴勉华; 孙莎莎; 谢美萍; 姜泽群; 李文婷^*

来源：中药新药与临床药理, 2023, 34(11): 1505-1513.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2023.11.003

• 消癌解毒方
• 肝癌
• 蛋白组学
• IL-6/TNF-α/STAT3信号通路
• 小鼠

目的 通过对H22肝癌荷瘤小鼠血清蛋白质组学检测，探讨消癌解毒方抑制肝癌小鼠肿瘤增殖促进凋亡的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、消癌解毒方组、顺铂组、消癌解毒方联合顺铂组。构建H22肝癌荷瘤小鼠模型，给药干预，连续给药11 d，次日剥取瘤体、胸腺和脾脏，计算抑瘤率和免疫系数；病理检测肿瘤光镜下差异表现；流式细胞仪检测各组凋亡情况；制备血清，以TMT肽段标记结合LC-MS/MS寻找差异蛋白表达谱，应用IPA软件进行分析；Elisa法检测血清中白细胞介素6(Interleukin6,IL-6)和血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达；蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测信号传导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)、c-Myc、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、裂解半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-Caspase-3)和裂解半胱氨酸蛋白酶9(Cleaved-Caspase-9)蛋白含量。结果 与模型组比，用药后各组小鼠肿瘤质量均有不同程度的减小（P<0.01）；消癌解毒方、顺铂和消癌解毒方联合顺铂组抑瘤率分别为40.59%、53.84%、67.32%；顺铂组免疫指数降低（P<0.05），消癌解毒方和消癌解毒方联合顺铂组免疫系数均较模型组明显上升（P<0.05,P<0.01）；病理检测结果显示，与模型组比，各组瘤组织坏死程度加大，分裂增殖程度减轻；流式细胞仪检测结果显示各加药组凋亡率较模型组均明显上升（P<0.01）。蛋白组学检测显示，消癌解毒方与模型组比差异蛋白共132个，其中下调蛋白95个，上调蛋白37个，这些差异表达涉及脂质代谢、凋亡、炎症等方面。Elisa检测提示模型组IL-6和TNF-α的表达量均较正常组上调（P<0.01），各加药组与模型组比明显下降（P<0.05,P<0.01）;Western Blot检测结果显示给药后瘤组织中p-STAT3蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01），其下游基因c-Myc、Bcl-2蛋白含量明显降低（P<0.01）,Bax、Cleaved-Caspase-3和Cleaved-Caspase-9蛋白含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 消癌解毒方可以抑制肝癌小鼠肿瘤增殖并促进其凋亡，可能与调控IL-6/TNF-α/STAT3信号通路有关，且消癌解毒方联合顺铂可以提高小鼠免疫功能，减轻顺铂毒副作用，增强抗肿瘤疗效。

• 单位
  南京中医药大学; 第一临床医学院