鲢鱼背肌组织蛋白酶L的初步分离及蛋白层析纯化方法

作者：王谦; 焦熙栋; 闫博文; 孟令璐; 曹洪伟; 黄建联; 赵建新; 张灏; 陈卫; 范大明^*

来源：中国食品学报, 2022, 22(03): 111-119.

DOI：10.16429/j.1009-7848.2022.03.014

• 鲢鱼
• 组织蛋白酶L
• 初步分离
• 蛋白层析

研究鲢鱼背肌中组织蛋白酶L的初步分离和纯化方法，重点研究初步分离过程中酸化处理条件、硫酸铵饱和度和透析袋分子质量对粗酶液中组织蛋白酶L活性的影响，以及纯化过程中不同类型离子交换层析柱和离子交换平衡缓冲液pH值对蛋白层析纯化的影响。结果表明：盐析最佳硫酸铵饱和度范围55%～90%，酸处理最优条件pH 3.0,40℃热处理10 min后pH值回调至6.0，透析袋最佳分子质量7 000 u。采用弱阴离子交换和分子筛两步层析法，选取20 mmol/L、pH 6.0磷酸盐缓冲液作为弱阴离子柱的平衡缓冲液，可得到45 ku电泳纯组织蛋白酶L，其纯化倍数为487，回收率为22 mg/1 000 g。本法可最大限度地去除杂蛋白且操作简便、回收率高，为探究鱼糜凝胶劣化现象的有效抑制方法奠定了良好的基础。

• 单位
  江南大学; 福建安井食品股份有限公司; 食品科学与技术国家重点实验室