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摘要
【目的】分析数据非依赖性采集高分辨率色谱—质谱技术（DIA LC-MS）对根尖差异蛋白质样品检测的适用性，为深入研究烟草蛋白质组学提供技术支撑。【方法】以6个烟草品种（系）移栽后74 d的根尖组织为试验材料，采用DIA LC-MS法对裂解的蛋白质肽段进行扫描，从而分析该方法对根样组织的适用性。【结果】采用TCA/丙酮沉淀+SDT裂解法提取根尖总蛋白质，能得到横向条带平行性好，电泳条带清晰的蛋白质样品，样品等级评价均达到A级。构建的DDA数据库包含28042条肽段，共鉴定出7084个蛋白质。DIA数据的色谱峰平均数据点为7，平均的峰容量达260，主要肽段的保留时间（iRT）均被检测出，且整体较稳定，在Q值为0.01标准下的一致性评分（Cscore）为0.948，变异系数（CV）中值为11.5%（小于20.0%），相关系数大于0.9。DIA全息扫描模式下从6个烟草品种（系）的根尖组织中鉴定出的蛋白质数目为4149～5069个。【结论】DIA LC-MS分析鉴定的蛋白质范围广、数量大、可信度高，具有一定的可靠性和稳定性，各项质控指标均能达到试验分析要求，说明DIA LC-MS适用于烟草根尖蛋白质组样品的检测分析。
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单位贵州大学; 浙江中烟工业有限责任公司
