CYP3A29稳定表达HepG_2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定

作者：薛正楷; 魏泓; 商海涛; 叶彬

来源：中国人兽共患病学报, 2009, 25(07): 640-644+649.

DOI：10.3969/j.issn.1002-2694.2009.07.007

• 巴马小型猪
• CYP3A29同工酶
• HepG2
• 逆转录酶PCR
• Western-blot
• 硝苯地平

目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHI/XhoI双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1( )中,并测序验证;将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,经RT-PCR及Western-blot分析及探针药物硝苯地平对重组细胞进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A29细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A29的HepG2细胞株,可用于相关药物代谢研究。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 重庆医科大学