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摘要
【目的】建立一套多重RT-PCR方法，用于同时检测和鉴别大蒜大田植株和组培苗5种病毒/病毒组。【方法】根据相关文献和GenBank公布的参考病毒株序列，设计了5对分别针对青葱潜隐病毒（Shallot latent virus,ShLV）、大蒜普通潜隐病毒（Garlic common latent virus,GarCLV）、韭葱黄条病毒（Leek yellow stripe virus,LYSV）、洋葱黄矮病毒（Onion yellow dwarf virus,OYDV）和青葱X病毒属病毒（allexiviruses）的特异性引物，扩增产物大小分别为592、431、338、265、190 bp。利用建立的多重RT-PCR方法，分别对24份大蒜组培苗和48份大田样本进行病毒检测分析。【结果】通过单重/多重PCR及序列比对验证了检测系统的特异性。通过退火温度和引物比例优化，确定退火温度为56.6℃且ShLV、GarCLV、LYSV、OYDV、allexiviruses引物体积比为10∶8∶3∶3∶16时，扩增效果最好。5种病毒/病毒组的最低检测浓度均为1.0×102copies/μL。大蒜组培苗病毒检测结果具有丰富的多样性，大田样品被至少2种病毒/病毒组感染，病毒/病毒组之间可以清晰区分。【结论】开发的多重RT-PCR方法可以快速、有效地检测和鉴别大蒜ShLV、GarCLV、LYSV、OYDV和allexiviruses这5种病毒/病毒组的感染情况。
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