耐辐射球菌pprI基因真核表达载体的构建及其抗辐射作用

作者：文玲; 施怡; 任丽丽; 丛瑛; 杨占山

来源：中华放射医学与防护杂志, 2014, 34(08): 563-568.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2014.08.002

• 耐辐射球菌
• pprI基因
• 急性放射损伤
• 辐射抗性

目的研究耐辐射球菌pprI原核基因的真核表达载体的构建及其转染对离体真核细胞急性放射损伤的防护作用。方法应用DNA重组技术构建pEGFP-c1-pprI质粒;采用脂质体转染技术分别将空载体质粒pEGFP-c1和重组质粒pEGFP-c1-pprI转入人肺上皮细胞系Beas-2B细胞,筛选稳定转染细胞系;应用集落形成实验检测受照转染细胞的生存能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化;荧光显微镜观察受照细胞ROS荧光强度;免疫荧光实验观察受照细胞不同时间γ-H2AX焦点数目。结果成功地构建了pprI原核基因的真核表达载体,并在Beas-2B细胞中表达了PprI融合蛋白,建立了稳定转染细胞系。与空白对照组和空载体组相比,细胞克隆生存曲线显示转染了pprI基因的Beas-2B细胞经不同剂量辐射,其存活分数SF增加,该曲线参数D0、Dq、N增高;转染了pprI基因的Beas-2B细胞受照后的ROS的荧光强度和不同时间(1、2、4 h)γ-H2AX的焦点数均显著减低(F=16.73、19.47、6.94,P<0.05);此外,该细胞G2期阻滞(F=139.73、237.92,P<0.05)和凋亡率显著减低(F=626.02、2 052,P<0.05)。结论耐辐射球菌pprI原核基因可在离体真核细胞中稳定表达,并且显著提高受照真核细胞的辐射抗性。

• 单位
  苏州大学