BIN1基因对阿尔茨海默病细胞模型Tau磷酸化及p38MAPK/NF-κB通路的影响

作者：陈娟^*; 满劲进; 李兴义; 杨帆; 陈显兵; 袁林

来源：神经损伤与功能重建, 2022, 17(12): 696-700.

DOI：10.16780/j.cnki.sjssgncj.20220214

• 桥连整合蛋白1
• 阿尔茨海默病
• Tau
• p38MAPK
• 核因子κB

目的：探讨BIN1基因对AD细胞模型Tau磷酸化及p38MAPK/NF-κB通路的影响。方法：(1)构建BIN1过表达质粒与BIN1的小干扰RNA(siRNA),q PCR检测BIN1表达效果，选取效果最佳片段转染PC12细胞。(2)通过Aβ25-35诱导转染的PC12细胞建立AD细胞模型，利用qPCR方法检测Tau和p-Tau的mRNA转录水平，MTT法及Caspase3活性检测判断AD模型是否建立成功。(3)实验分为4组：空白组，AD模型组，过表达组，siRNA组。(4)Western blot法检测各组细胞BIN1表达水平及Tau、磷酸化Tau(p-Tau,Ser396位点)、p38MAPK、核因子κB(NF-κB)蛋白的表达；(5)生化试剂盒检测各组细胞上清中一氧化氮（NO）水平；ELISA法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β等炎性因子表达。结果：(1)BIN1过表达质粒显著上调BIN1的转录水平（P<0.01）,siRNA明显下调BIN1的转录水平表达（P<0.01）。(2)MTT实验结果显示，AD模型组细胞存活率较空白组显著下降（P<0.01）;Caspase3活性检测结果显示，AD模型组细胞Caspase3活性较空白组显著增加（P<0.01）。(3)Western blot检测结果显示，BIN1在AD模型组、过表达组中表达明显高于空白组（P<0.01），在siRNA组中表达明显低于空白组（P<0.01）；空白组、siRNA组、AD模型组、过表达组中Tau、p-Tau(Ser396)蛋白表达依次增多，组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。(4)与AD模型组相比较，过表达组中p38MAPK和NF-κB蛋白水平明显上升（P<0.05）,siRNA组中p38MAPK和NF-κB蛋白水平明显降低（P<0.05）。(5)空白组、siRNA组、AD模型组、过表达组中IL-1β、TNF-α、NO水平依次增多，单因素方差分析及组间两两比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：BIN1可能通过影响p38MAPK/NF-κB信号通路参与了tau蛋白的异常磷酸化过程，导致AD病程持续发展。

• 单位
  湖北民族大学; 神经内科