重楼皂苷Ⅶ通过DNA损伤介导的p53信号通路诱导肺腺癌循环肿瘤细胞簇凋亡

作者：上官文姬; 于盼; 钱芳芳; 王盼盼; 阙祖俊; 田建辉^*

来源：中国中西医结合杂志, 2022, 42(07): 849-855.

• 肺癌
• 循环肿瘤细胞簇
• DNA损伤
• 重楼皂苷Ⅶ
• 中药

目的 研究中药复方金复康中有效组分重楼皂苷Ⅶ诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞簇(CTC-TJH-01)凋亡的作用及机制。方法 采用不同浓度的重楼皂苷Ⅶ(0、1.2、2.5、5、10、20μmol/L)处理悬浮培养的CTC-TJH-01细胞簇,CCK-8法检测对CTC-TJH-01细胞簇增殖的影响;FCM法检测对细胞周期和细胞凋亡的影响;Hoechest 33258染色后免疫荧光法检测对细胞核损伤的影响;RNA-seq法检测对细胞基因表达的影响,并用Omics Bean-Cancer数据库分析差异基因及涉及的信号通路;蛋白质印迹法检测DNA损伤相关蛋白和p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果 重楼皂苷Ⅶ的浓度高于为2.5μmol/L时可抑制CTC-TJH-01细胞簇的增殖(P<0.05);浓度为1.8、3.6μmol/L时即可诱导CTC-TJH-01细胞簇的细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);浓度为3.6μmol/L时可诱导CTC-TJH-01细胞簇发生凋亡,且细胞核的荧光呈现高亮状(P<0.05);蛋白质印迹法检测结果显示DNA损伤相关蛋白DFF45的表达水平下调;RNA-seq结果显示差异基因主要涉及p53和细胞周期信号通路,蛋白质印迹法检测结果显示,重楼皂苷Ⅶ可上调Cleaved-caspase 3、p53、p21蛋白的表达水平,下调Cyclin E、CDK2蛋白表达水平(P<0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ通过调控DNA损伤诱导肺腺癌循环肿瘤细胞簇凋亡,进而通过p53信号通路抑制肺腺癌循环肿瘤细胞簇增殖,这可能是金复康发挥抗肺癌转移作用的机制之一。

• 单位
  上海中医药大学; 上海中医药大学附属龙华医院; 上海交通大学医学院附属仁济医院; 上海市中医药研究院