洋葱伯克霍尔德氏菌L68邻苯二酚2,3-双加氧酶基因克隆、表达和纯化

作者：吕鹏; 刘大桅; 张长铠

来源：食品与生物技术学报, 2006, (03): 11-14.

• 洋葱伯克霍尔德氏菌
• 邻苯二酚2
• 3-双加氧酶
• 克隆表达
• 金属螯合层析 Burkholderia cepacia
• catechol 2
• 3-dioxygenase
• cloning
• expression
• purification

采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE(邻苯二酚2,3-双加氧酶)基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中。经双向测序,证实构建过程中未出现突变。重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶。选择26℃进行重组蛋白诱导。薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%。利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%。

• 单位
  山东大学; 微生物技术国家重点实验室