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摘要
目的 探讨不同滴度ROCK2-shRNA腺相关病毒(AAV9-ROCK2-shRNA)转染对血管性痴呆(VaD)大鼠海马神经元的保护作用。方法 选取成年SPF级健康雄性SD大鼠40只，随机分为正常组、PBS对照组、低滴度组、中滴度组、高滴度组(n=8)。采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备VaD模型，将AAV9-ROCK2-shRNA按原液(高滴度)、2倍(中滴度)、10倍(低滴度)稀释后，采用脑立体定位术注射至大鼠海马组织周围。于1周及4周后，进行Morris水迷宫测试大鼠学习和记忆能力变化，并于第4周行为学观察后取材，采用HE与尼氏染色观察神经元形态、分布及数量变化，免疫组化检测IL-1β阳性细胞数，荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的转染情况。结果 与正常组比较，PBS对照组术后1周与4周逃避潜伏期延长、跨越平台次数显著减少，神经元损伤明显，尼氏小体显著减少，差异有统计学意义(均P<0.05);与PBS对照组比较，术后1周，低、中、高滴度组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数差异无统计学意义(均P>0.05);术后4周，低、中、高滴度组较PBS对照组逃避潜伏期时间缩短、跨越平台次数增加，神经元排列整齐、形态更规则，尼氏小体增多，IL-1β阳性细胞数明显减少(均P<0.05);与中滴度组比较，术后1周，低、高滴度组的潜伏期、跨越平台次数差异无统计学意义(均P>0.05);术后4周，低、高滴度组大鼠逃避潜伏期延长、跨越平台次数减少，海马神经元受损更严重，尼氏小体数减少，IL-1β阳性细胞数增多，GFP转染率显著降低(均P<0.05)。结论 中滴度AAV9-ROCK2-shRNA能高效、稳定、低毒地转染大鼠海马组织，对VaD大鼠海马神经元保护作用最优。
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