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摘要
目的探讨西维来司他钠(SV)对脓毒症急性肾损伤(AKI)大鼠的保护作用及机制。方法按照随机数字表法将64只雄性Wistar大鼠分为假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔术致脓毒症组(CLP组)、脓毒症+SV低剂量组(SL组, 术后12 h、24 h尾静脉注射SV 50 mg/kg)、脓毒症+SV高剂量组(SH组, 术后12 h、24 h尾静脉注射SV 100 mg/kg), 每组16只, 记录大鼠48 h存活情况, 并于制模后48 h处死大鼠并取材。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肾损伤分子-1(KIM-1)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)水平;苏木素-伊红(HE)染色后, 光镜下观察肾脏组织病理学改变并进行肾小管损伤评分;Masson染色检测肾脏组织胶原容积分数(CVF);蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肾脏组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和NE的蛋白表达;免疫组化法检测肾脏组织中p-PI3K、p-AKT、NF-κB p65的阳性面积。结果与Sham组相比, CLP组大鼠术后48 h存活率明显下降;组织病理学结果显示大片肾小管上皮细胞和刷状缘脱落, 肾小管内管型形成, 部分肾小管轻度萎缩, 肾小球充血, 肾间质炎症细胞浸润, 肾小管损伤评分升高;肾间质纤维化病变明显, CVF增加;血清中KIM-1、IL-1β、IL-6、TNF-α及NE水平明显升高;肾脏组织中炎症通路相关蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB p65及NE表达均明显增加, 提示CLP组脓毒症大鼠肾损伤, PI3K/AKT炎症通路活化。与CLP组相比, 给予低剂量或高剂量SV干预后大鼠48 h存活率虽无明显增加(68.75%、75.00%比56.25%, 均P>0.05), 但肾脏损伤有所缓解, 具体表现为:肾小管损伤评分下降〔分:2(1, 2)、1(1, 1)比2(2, 3), 均P<0.05〕, CVF显著降低〔(22.36±0.86)%、(18.74±1.05)%比(58.38±0.79)%, 均P<0.05〕, 血清KIM-1、IL-1β、IL-6、TNF-α及NE水平明显降低〔KIM-1(ng/L):145.03±8.88、117.58±7.02比158.22±12.00, IL-1β(ng/L):108.32±9.00、92.98±8.06比133.78±8.48, IL-6(ng/L):124.33±10.11、115.42±8.17比165.19±5.70, TNF-α(ng/L):321.56±19.29、289.68±21.57比424.88±22.76, NE(mol/L):93.84±9.14、75.01±10.56比113.45±6.39, 均P<0.05〕, 肾脏组织炎症通路相关蛋白p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB p65及NE的蛋白表达明显下降(p-PI3K/PI3K:0.93±0.06、0.67±0.04比1.27±0.08, p-AKT/AKT:0.78±0.09、0.47±0.05比0.96±0.12, NF-κB p65/GAPDH:1.43±0.13、0.85±0.08比1.88±0.17, NE/GAPDH:1.45±0.06、0.91±0.04比1.71±0.08, 均P<0.05), 肾脏组织p-PI3K、p-AKT、NF-κB p65表达明显降低〔p-PI3K阳性面积:(13.36±1.84)%、(8.03±1.12)%比(21.56±1.20)%, p-AKT阳性面积:(21.57±0.91)%、(15.21±2.76)%比(30.81±2.12)%, NF-κB p65阳性面积:(25.17±1.38)%、(17.07±2.11)%比(37.85±2.50)%, 均P<0.05〕。SH组血清炎症因子水平和肾脏组织PI3K/AKT通路相关蛋白、NF-κB p65、NE蛋白表达水平及p-PI3K、p-AKT、NF-κB p65阳性面积等指标均较SL组进一步降低(均P<0.05)。结论 SV对脓毒症合并AKI模型大鼠能起到一定的保护作用, 其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路相关, 且高剂量SV疗效更佳。
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单位新疆医科大学第一附属医院
