人源噬菌体Fab抗体库构建过程中引物的优化和初步鉴定

作者：包国强; 马庆久; 邢金良; 杨向民; 陈志南

来源：免疫学杂志, 2004, (03): 220-223.

DOI：10.3969/j.issn.1000-8861.2004.03.015

• 抗体库
• Fab
• 引物
• 优化

目的　优化设计一套引物 ,扩增全套人抗体Fd片段和L链基因 ,改善扩增效率 ,益于人源噬菌体抗体库的构建。方法　根据V BASE数据库提供的人抗体可变区胚系基因 ,在其家族分类基础上 ,根据FR1区 5’端保守序列重新分组 ,设计特异性的 5’端扩增引物。同时对设计引物的匹配情况进行分析 ,并应用PCR扩增和测序反应对其扩增效果进行鉴定。结果　Fd链 5’端扩增引物有 5条 ,κ轻链有 6条 5’端扩增引物 ,而λ轻链 5’和 3’扩增引物有 10条。分析表明 ,人抗体可变区胚系基因与 5’引物有较好的匹配率 ,数目较少 ,匹配率较高。PCR结果显示 ,全部的重链及轻链引物对均能高效扩增出特异性较高的目的片段。测序结果表明PCR扩增产物具有较好的亚类和可变区家族分布。结论　优化了一套扩增全套人抗体Fd片段和L基因的引物 ,为人源噬菌体抗体库的构建奠定了良好的基础

• 单位
  唐都医院; 第四军医大学