检测β-CTX和N-MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价

作者：毛骞; 陈翠翠; 梁焕坤; 刘鹏娥; 钟树海; 李来庆^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2021, 47(03): 770-776.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20210330

• β胶联降解产物
• N端中分子片段
• 骨质疏松症
• 双抗体夹心
• 双标记时间分辨免疫荧光分析

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu3+)和钐离子(Sm3+)分别标记2G6和5A3 MAb作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。通过试剂盒的灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果:制备的双标记TRFIA试剂盒对β-CTX的检测灵敏度为0.025μg·L-1,线性范围为0.025～5.000μg·L-1,对N-MID的检测灵敏度为0.5μg·L-1,线性范围为0.5～200.0μg·L-1。β-CTX平均稀释回收率为102.13%,N-MID平均稀释回收率为103.02%,与其他常见骨检测指标无明显交叉反应,特异性较强。β-CTX批内变异系数(CV)为5.81%～7.82%,批间CV为5.97%～8.02%;N-MID批内CV为6.05%～8.32%,批间CV为6.14%～8.56%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论:建立的双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异度、高准确率和方便快捷等优点,适用于大批量临床样品的检测。

• 单位
  广州优迪生物科技股份有限公司; 北华大学附属医院