塞内卡病毒A VP2蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立与应用

作者：孙培培; 朱慧欣; 延君芳; 刘文文; 姜平; 白娟^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(09): 1097-1105.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0161

• 塞内卡病毒A
• VP2蛋白
• 单克隆抗体
• 阻断ELISA

为加强塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的鉴别诊断及流行病学监测。本研究以SVA重组VP2蛋白及其对应的辣根过氧化酶(HRP)标记的单克隆抗体,建立了检测SVA抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后,抗原最佳包被浓度为0.25μg/m L,37℃孵育2 h后4℃过夜;最佳封闭液为1%BSA,37℃孵育1 h;待检血清最佳稀释度为1∶1,37℃孵育1.5 h;酶标单抗最佳稀释度为1∶1 000,37℃作用45 min;TMB最佳显色时间为37℃作用10～15 min。本方法的判定标准:当阻断率(PI)≥41.25%时为阳性,PI≤25.29%时为阴性,25.29%<PI<41.25%时为可疑。该方法与FMDV、PRV、PRRSV、CSFV和PCV2等参考阳性血清均无交叉反应性。批内和批间重复性试验结果显示,变异系数均小于11%。与中和试验的符合率为70.1%。对506份临床猪血清样品的检测结果显示,SVA抗体阳性率达74.5%。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与稳定性,可用于检测血清中的SVA抗体。

• 单位
  农业部