中间产物介导拼接扩增法检测高度降解DNA的初步研究

作者：张振^*; 关红玉; 李伟

来源：医药论坛杂志, 2020, 41(09): 20-28.

• DNA分析
• DNA降解
• 中间产物
• 聚合酶链式反应

目的高度降解DNA的遗传检验分析,一直是多个学科领域的难题之一。本文报道一种从降解模板制备较大片段DNA的新方法—中间产物拼接扩增法(IMSA)。方法首先,以高度降解DNA为模板,使用短小扩增子PCR技术,分组合成末端相互重叠的小片段初始扩增产物(<165 bp);而后,将小片段初始扩增产物混合物作为次级模板,以80℃退火进行酶促延伸循环,逐步拼接成长度不等的中间产物(208～316 bp),最终生成大片段扩增终产物(422 bp);随后,用最外侧引物,对大片段IMSA终产物进行PCR倍增。最后,对IMSA终产物进行测序,验证其扩增可靠性。使用甲醛固定石蜡包埋组织DNA样品,验证IMSA方法的实用性。结果 IMSA终产物与参照DNA扩增产物长度均为422bp,测序序列完全一致,终产物序列完全忠实于来源DNA。使用本文方法,对于陈旧的甲醛固定石蜡包埋组织,成功实现了较大片段终产物(422bp)的扩增分析。结论针对高度降解DNA缺少大片段扩增模板的问题,本文IMSA方法可以直接拼接合成大片段DNA终产物,预期在法医、考古、病理等领域有较好的应用前景。

• 单位
  铁道警察学院