血小板衍生生长因子D(PDGF-D)转基因鼠模型的鉴定

作者：王伟; 韩玉; 惠汝太

来源：中国分子心脏病学杂志, 2004, (02): 20-24.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6272.2004.02.005

• PDGF-D
• Southern Blot
• PCR

目的 :通过SouthernBlot的方法鉴定PDGF D转基因鼠。方法 :显微注射Alpha MyHC PDGF D质粒后 ,产生的PDGF D转基因c5 7小鼠养至 4～ 6周。取 0 5～ 1 0cm的小鼠尾巴 ,蛋白酶K消化过夜 ,提取基因组DNA。PCR方法初步筛选 ,阳性鼠进行进一步的SouthernBlot验证。紫外分光光度法定量基因组DNA ,EcoRI酶切过夜 ,酶切产物经纯化后 ,电泳 ,转膜。PCR方法制备Alpha MyHC PDGF D载体上特异的hGHPolyA探针 ,然后由32 P dCTP标记探针 ,与转好的膜相互杂交 ,- 70摄氏度在X光片上曝光约 1个月 ,得到转基因鼠鉴定的结果。结果 :SouthernBlot显示 4笼共 2 0只PDGF D转基因鼠只有一只是阳性鼠

• 单位
  中国医学科学院; 阜外心血管病医院; 中国协和医科大学