DNA载体介导的小干扰RNA Tet-on基因表达系统的调控效应检测

作者：李朵璐; 周玉冰; 韩超; 安琪; 李峰; 段震峰; 张晓坚; 阚全程

来源：中国现代医学杂志, 2017, 27(07): 30-35.

• 小分子干扰RNA
• 四环素调控系统
• DNA载体
• 基因调控

目的观察构建的DNA载体介导的小干扰RNA Tet-on基因表达系统的调控效应。方法构建DNA载体介导的小干扰RNA(siRNA)Tet-on表达载体,pDIRS4.1 siRNA。以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和白细胞介素6(IL-6)基因为目的基因,应用脂质体介导的瞬时转染方法,分别将pDIRS4.1/EGFP siRNA载体和p EGFP-N3质粒、pDIRS4.1IL-6siRNA载体和p IRESIL-6质粒共转染人成骨肉瘤细胞,加入系列浓度的四环素(Dox)后,观察其诱导效应。结果 pDIRS4.1 siRNA在人成骨肉瘤细胞中能够高效转染;随着Dox浓度升高,pDIRS4.1 siRNA载体在人成骨肉瘤细胞中对目的基因的沉默作用有较好的调控性,且目的基因的表达与Dox具有严格的剂量依赖关系,高浓度Dox时,IL-6表达水平降低约12倍。结论该研究构建的以DNA载体介导的能够高效调控siRNA沉默基因效应的Tet-On基因表达系统,能够促进其在更多模型系统中进行基因功能研究的应用。

• 单位
  郑州大学第一附属医院