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摘要
为制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的单克隆抗体（MAb），本研究采用蔗糖密度梯度离心法纯化BVDV ZD-2018株，以纯化的BVDV全病毒为抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合，采用间接ELISA方法筛选阳性克隆、有限稀释法进行5次亚克隆，获得6株稳定分泌抗BVDV的杂交瘤细胞株，命名为6D2F2、4H6A6、1D8C7、1G8D8、1C7E7和3A8E1，其中6D2F2、1G8D8、1C7E7和3A8E1属于IgG2α亚类，4H6A6属于IgG1亚类，1D8C7属于IgG2b亚类。间接免疫荧光试验结果显示，所制备的6株单抗均能够与BVDV反应，利用原核表达的BVDV结构蛋白C、E0、E1 和E2对获得的MAbs进行Western blot鉴定，结果显示，单抗6D2F2、4H6A6、1D8C7和1G8D8能够特异性识别BVDV E2蛋白，单抗1C7E7和3A8E1能够特异性识别BVDV E0蛋白。采用间接ELISA评价了6株单抗的特异性，结果显示，与CSFV、IBRV、BPV、BRV、BRSV和BPIV3均无交叉反应。进一步基于单抗4H6A6制备了单抗腹水（效价为1:106），经抗体纯化和辣根过氧化物酶标记后用于检测人工感染BVDV的犊牛肠道组织中的病毒，结果显示利用本实验制备的MAb初步建立的免疫组化法可定性检测组织中的BVDV。本研究制备的BVDV MAb为BVDV快速检测方法的建立及其病原学研究提供了物质基础。
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