健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧皮质Claudin-5、Occludin、p-BAD、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

作者：陈佳敏; 李花^*; 刘旺华; 陈岩岩; 陈心豪

来源：环球中医药, 2023, 16(04): 653-660.

• 脑缺血再灌注
• 健脾补土方
• 磷酸化相关死亡启动因子
• B淋巴细胞瘤-2基因
• 半胱氨酸蛋白酶-3
• 紧密连接蛋白-5
• 闭合蛋白

目的 探讨健脾补土方减轻脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的可能作用机制。方法 将80只SD大鼠随机分为假手术组10只、手术组70只，手术组经模型制备后评价，剔除不成功的及死亡大鼠，二次分组，分为模型组、依达拉奉组、健脾补土方高、中、低剂量组，每组各13只。手术组采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion, MCAO),干预7天，取材。取材前每组选取10只，采用国际公认的大鼠脑卒中后神经功能缺损评分法(mNss评分)进行神经功能缺损评分。取材部位为缺血侧脑皮质组织。每组随机选取3只采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色法观察病理形态改变；每组随机选取其中5只采用Western blot法检测紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、闭合蛋白(Occludin)表达量；剩余5只采用免疫组化法检测磷酸化相关死亡启动因子(phospho-Bcl-xL/Bcl-2 asociated death promoter, p-BAD)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达量。结果 (1)造模后，与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分明显上升，经药物干预后，各组神经功能缺损评分均有所下降(P<0.05),其中以依达拉奉组与健脾补土方高剂量组下降最为明显；(2)造模后，模型组大鼠较假手术组病理改变严重，出现组织大片坏死，经药物干预后，各组病理改变均有所改善，依达拉奉组和健脾补土方高剂量组尤为明显；(3)与模型组比较，各药物干预组脑组织缺血皮质区Occludin、Claudin-5蛋白表达均有所上调，差异有统计学意义(P<0.05),其中以依达拉奉组和健脾补土方高剂量组最为显著；(4)与模型组比较，各药物干预组脑缺血皮质组织p-BAD、Bcl-2蛋白表达均明显增加，Caspase-3蛋白表达有所降低(P<0.05),其中依达拉奉组与健脾补土方高剂量组最为显著。结论 健脾补土方可能通过上调p-BAD、Bcl-2、Claudin-5、Occludin蛋白表达，下调Caspase-3蛋白表达，从而改善脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损症状及脑组织病理改变，进而促进缺血脑组织损伤修复。

• 单位
  湖南中医药大学