双基因重组载体在兔乙醇性股骨头坏死模型中抑制成脂与促进成骨基因表达的作用

作者：李劲峰; 马源; 刘柯希; 王秀利; 尚国伟; 李月白; 王义生^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, (10).

• 双基因重组载体
• 乙醇
• 干细胞
• 基因表达
• 兔

目的 观察双基因重组载体在兔乙醇性股骨头坏死模型中抑制成脂与促进成骨基因表达的作用。方法 健康新西兰大耳白兔80只,随机平均分为5组：(1)双基因组：马血清致敏后烈性白酒10 ml/(kg·d)灌胃,一侧股骨头内注入转染双基因重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP的骨髓间充质干细胞(BMSCs)。(2)无关序列组：马血清致敏后烈性白酒10 ml/(kg·d)灌胃,一侧股骨头内注射转染无关序列pGFP-V-RS的BMSCs。(3)模型组：马血清致敏后烈性白酒10 ml/(kg·d)灌胃。(4)致敏组：仅马血清致敏。(5)正常组：空白对照。实验第4、8周提取各组兔股骨头组织中总RNA及总蛋白,应用TaqMan实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)与蛋白质印迹法(Western blot)检测过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)、降钙素基因相关肽(CGRP)、核心结合蛋白因子2(Runx2)、骨钙素(Osteocalcin) mRNA与蛋白表达。应用SPSS 17.0统计软件分析,两样本两组间比较采用t检验；数值变量资料统计采用方差分析,组间比较采用LSD法。结果 实验第4周,双基因组股骨头细胞内PPARγ mRNA与蛋白表达量(0.502±0.054与0.302±0.035)与正常组(0.486±0.054与0.315±0.041)接近,差异均无统计学意义(P>0.05)；明显低于模型组(0.821±0.092与0.703±0.081)、无关序列组(0.875±0.103与0.664±0.077),差异均有统计学意义(P<0.05)。双基因组CGRP mRNA与蛋白呈高表达(0.772±0.109与0.608±0.059),显著高于正常组(0.467±0.062与0.296±0.027)、模型组(0.118±0.015与0.113±0.010)、无关序列组(0.123±0.016与0.122±0.013),差异均有统计学意义(P<0.05)。双基因组Runx2、Osteocalcin mRNA与蛋白呈高表达(0.733±0.092与0.613±0.069)、(0.628±0.073与0.673±0.081),显著高于正常组(0.436±0.057与0.325±0.036)、(0.367±0.041与0.374±0.046)、模型组(0.133±0.014与0.096±0.012)、(0.096±0.010与0.126±0.015)、无关序列组(0.113±0.016与0.104±0.011)、(0.087±0.011与0.132±0.015),差异均有统计学意义(P<0.05)。实验第8周各组表达量与第4周一致。结论 双基因重组载体能够有效靶向阻断活体兔乙醇性ONFH模型股骨头细胞内成脂基因表达,同时促进细胞内成骨基因表达,显著优于单一基因的作用。

• 单位
  河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室; 郑州大学第一附属医院; 基础医学院; 郑州大学