人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

作者：王晗; 于蕊; 张晓鹏; 任军; 谢娜; 樊红艳; 张金龙; 房婷; 于长明; 陈薇

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2013, (01): 60-64.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006701

• 单链二硫键稳定抗体
• 亲和力
• 原核表达
• 破伤风痉挛毒素C端 disulfide-stabilized single-chain Fv antibody
• affinity
• prokaryotic expression
• tetanus toxin Hc fragment

目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在...

• 单位
  中国人民解放军军事医学科学院; 解放军第302医院