摘要
背景:紫朱软膏由黄芪、紫草、朱砂、龙血竭、阿胶、冰片6味中药组成,有清热解毒、祛腐生肌、补气益血的功效。前期临床和动物实验已证实其在糖尿病溃疡愈合过程中发挥抑制炎症、促进血管生成的作用。目的:在细胞水平上探究紫朱醇提取物对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3细胞)损伤的保护作用,并研究其对血管生成的影响。方法:模拟高糖高脂环境,采用不同质量浓度的葡萄糖和棕榈酸诱导bEnd.3细胞损伤,给予不同质量浓度的紫朱醇提取物干预,用CCK-8法筛选出最合适的刺激物质量浓度和最佳给药质量浓度;然后通过划痕实验、血管生成实验观察紫朱醇提取物对bEnd.3细胞促血管生成的影响,采用AnnexinV/PI凋亡试剂盒检测bEnd.3细胞凋亡率,采用Western blot和qRT-PCR法检测bEnd.3细胞中VEGFA、Ang-2、SPRED1、PIK3R2的蛋白和mRNA表达水平。结果与结论:(1)经CCK-8法检测细胞活力,最终选定25 mmol/L葡萄糖+200μmol/L棕榈酸作用24 h作为模型组,500 mg/L紫朱醇提取物作用24 h作为紫朱醇提取物组给药方式;(2)与正常对照组相比,模型组b End.3细胞迁移和生成血管能力下降(P <0.001,P <0.05),bEnd.3细胞凋亡率上升(P <0.001),VEGFA、Ang-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P <0.001),SPRED1、PIK3R2 mRNA和蛋白表达显著增加(P <0.001);(3)与模型组相比,紫朱醇提取物组bEnd.3细胞迁移和血管生成能力上升(P <0.05),b End.3细胞凋亡率显著下降(P <0.001),VEGFA、Ang-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P <0.001),SPRED1、PIK3R2 mRNA和蛋白表达显著降低(P <0.001,P <0.05);(4)结果表明,紫朱醇提取物对高糖高脂诱导的bEnd.3细胞具有保护作用,能够促进细胞迁移和血管生成并减少细胞凋亡。
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单位上海中医药大学; 上海健康医学院