补肺益肾方通过调控Notch信号通路改善香烟烟雾提取物诱导气道上皮细胞黏液高分泌

作者：梅晓峰; 任周新; 余海滨^*

来源：中华危重病急救医学, 2022, 34(07): 704-709.

• 补肺益肾方
• Notch信号通路
• 香烟烟雾提取物
• 气道上皮细胞
• 黏液高分泌

目的基于Notch信号通路探讨补肺益肾方(BYF)抑制香烟烟雾提取物(CSE)诱导气道上皮细胞黏液高分泌的机制。方法体外培养人气道上皮细胞株16HBE, 取对数生长期细胞用于实验。①干预条件筛选实验:将16HBE细胞分组, 分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同浓度CSE(2.5%、5%、10%、20%、40%)、不同浓度BYF含药血清(5%、10%、20%、40%)及不同浓度Notch信号通路阻断剂DAPT(5、10、20、40 μmol/L)对细胞活性与分泌黏蛋白5AC(MUC5AC)水平的影响, 并设空白对照组, 筛选出制备CSE诱导细胞黏液高分泌模型及BYF、DAPT干预的最佳条件。②干预实验:将16HBE细胞分为4组。空白对照组不给予任何处理;CSE模型组采用10% CSE诱导16HBE细胞24 h制备黏液高分泌模型;CSE+BYF组和CSE+DAPT组在加入10% CSE的同时分别给予10% BYF或20 μmol/L DAPT干预24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中MUC5AC、Notch3和多毛分裂增强子1(HES1)的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞中Notch3和HES1的蛋白表达。结果①干预条件筛选实验结果:与空白对照组比较, 10% CSE诱导24 h是既不影响细胞活性又可增加MUC5AC分泌的制备细胞黏液高分泌模型的最佳条件;而10% BYF和20 μmol/L DAPT为最佳干预条件。②干预实验结果:与空白对照组比较, CSE模型组细胞中MUC5AC、Notch3、HES1的mRNA表达及Notch3、HES1的蛋白表达均显著升高, 说明CSE可能通过促进Notch3、HES1信号活化, 诱导16HBE细胞分泌黏蛋白;与CSE模型组比较, BYF和DAPT均可显著下调细胞中MUC5AC、Notch3、HES1的mRNA及蛋白表达〔MUC5AC mRNA(2-ΔΔCT):1.03±0.13、0.96±0.05比1.35±0.07, Notch3 mRNA(2-ΔΔCT):1.10±0.14、1.10±0.02比1.31±0.15, HES1 mRNA(2-ΔΔCT):1.26±0.10、1.14±0.15比1.45±0.08, Notch3蛋白(Notch3/GAPDH):0.10±0.03、0.16±0.03比0.31±0.09, HES1蛋白(HES1/GAPDH):0.37±0.06、0.34±0.08比0.50±0.05, 均P<0.05〕。结论 BYF可抑制CSE诱导的16HBE细胞黏液高分泌, 其机制与抑制Notch信号通路活化有关。

• 单位
  第一临床医学院; 河南中医药大学