差速离心法联合聚乙二醇6000富集脂肪间充质干细胞来源的外泌体

作者：李萍; 王静; 沈美萍; 戴成祥^*; 李苏克; 刘必佐

来源：中国医药生物技术, 2020, 15(05): 482-488.

• 聚乙二醇6000
• 差速离心
• 外泌体
• 间充质干细胞
• 干细胞

目的探讨通过聚乙醇6000(PEG 6000)富集分离外泌体,优化改善外泌体的分离产量。方法使用不同浓度PEG 6000分离外泌体,通过Western blot检测CD63的蛋白表达情况,筛选出最适浓度的PEG6000。以差速离心法分离出的外泌体为对照组,以最适浓度PEG 6000分离出的外泌体为实验组,比较两者之间的外泌体粒径、数量,蛋白水平(CANX、CD81、TSG101)的表达情况和miRNA(miR-133b和miR-124-3p)的表达情况。结果使用不同浓度PEG6000分离外泌体,12%PEG6000分离出的外泌体产量最多,最终筛选最适PEG6000浓度为12%完成后续实验。12%PEG 6000分离的外泌体和差速离心法分离出的外泌体作比较,前者的外泌体产量为1.35×108个/ml培养基,后者的外泌体的产量为6.8×107个/ml培养基。从蛋白水平(CANX、CD81、TSG101)的表达情况来看,同体积上样量和同蛋白上样量,PEG 6000分离的外泌体的蛋白表达水平远高于差速离心法分离出的外泌体。从miRNA(miR-133b和miR-124-3p)的表达情况来看,PEG6000分离的外泌体的miR-133b和miR-124-3p表达水平远高于差速离心法分离出的外泌体。PEG6000分离出的外泌体并不会影响成纤维细胞对其进行摄取,而且PEG6000分离出的外泌体的产量远比差速离心分离出的外泌体的产量多。结论 12%PEG6000分离出的外泌体的产量优于差速离心法分离出的外泌体,且不影响外泌体的稳定性。