侵染猕猴桃的柑橘叶斑驳病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备及检测应用

作者：刘欢; 吴薇; 朱育波; 杨鑫; 吴云锋^*

来源：植物病理学报, 2021, 51(03): 423-428.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.000530

• 猕猴桃
• 柑橘叶斑驳病毒
• 原核表达
• 多克隆抗体

柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV)是β线形病毒科(Betaflexiviridae)柑橘病毒属(Citrivirus)的代表种,前期研究表明CLBV在陕西栽培猕猴桃中广泛发生。为进一步简化CLBV的检测,并探究其致病机制,通过RT-PCR扩增得到CLBV猕猴桃分离物外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+),导入E. coli BL21(DE3)感受态细胞,成功表达出约59 kDa的融合蛋白。用纯化后的融合蛋白对大白兔进行皮下多点免疫注射,获得的抗血清经纯化浓缩后,最终得到浓度为3.78 mg·mL-1的多克隆抗体。将抗体1∶1 000稀释后可检测500 pg抗原,使用Dot-ELISA可直接检测田间猕猴桃样品。多克隆抗体的制备为CLBV的检测提供了便捷,也是后续研究CLBV致病机理的重要工具。

• 单位
  安康学院; 农业部; 旱区作物逆境生物学国家重点实验室; 西北农林科技大学