转录因子Prm1和Mit1对毕赤酵母产外源蛋白的影响

作者：邓云涛; 方浩; 史鹏^*

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2024, (01): 1-10.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2024.01.016

• 毕赤酵母
• 外源蛋白
• 转录因子
• 过表达

【目的】研究转录因子Prm1和Mit1在毕赤酵母表达外源蛋白中的作用,为提高毕赤酵母中的外源蛋白产量提供参考。【方法】以毕赤酵母GS115为出发菌构建8种菌株,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,过表达Prm1、Mit1或敲除Prm1、Mit1和Mxr1,以GFP的表达量为指标,分析其对毕赤酵母产外源蛋白的影响。在甲醇和甘油2种碳源下,利用实时定量PCR分析Prm1和Mit1在转录水平的表达情况,探究Prm1和Mit1的关系。【结果】成功构建了表达GFP的菌株、单因子过表达Prm1和Mit1的菌株及敲除Prm1、Mit1、Mxr1的菌株等8种菌株。利用PAOX1诱导型过表达Prm1,毕赤酵母细胞内的GFP表达量极显著提高(P<0.01),而用PGAP组成型过表达Prm1,GFP的表达量无明显变化;利用PAOX1诱导型和PGAP组成型过表达Mit1,GFP表达量均极显著提高(P <0.01),较对照分别提高3.2和2.5倍;敲除Prm1后,GFP的表达量显著下降(P<0.05);敲除Mit1后,GFP几乎不能发出荧光。实时荧光定量PCR结果显示,在甲醇和甘油2种碳源下,敲除Prm1后Mit1少量表达,敲除Mit1后Prm1大量表达。【结论】利用PAOX1诱导型过表达Prm1、Mit1和利用PGAP组成型过表达Mit1,均能提高GFP在毕赤酵母细胞内的表达量。Prm1和Mit1可作为正调控因子在毕赤酵母产外源蛋白中发挥作用,且Prm1能激活Mit1,Mit1可反馈抑制Prm1。

• 单位
  生命科学学院; 西北农林科技大学