山麦冬果实花青素生物合成中内参基因的筛选与验证

作者：干思宸; 师悦; 梁立军^*

来源：浙江农林大学学报, 2022, 39(02): 307-317.

• 山麦冬
• 实时定量PCR
• 花青素合成
• 内参基因

【目的】为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因。【方法】基于山麦冬转录数据，通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因。以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料，利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定候选内参基因的表达，采用ΔCt值法、geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件包分析候选基因的表达稳定性，最后选取来自6个基因家族(C4H、CHS、MT、UFGT、MYB和bHLH)的10个目的基因(C4H、CHS-1、CHS-2、MT、UFGT-1、UFGT-2、MYB-1、MYB-2、MYB-3、bHLH)，对所选内参基因组合进行验证。【结果】4种方法分析得出的候选内参排序存在一定差异，需综合4种方法的几何平均值作为综合排序。根据geNorm软件推荐的最适内参数目为4个，即CNNM、GPR107、EF1-α、G6PD-2最稳定，PDP最不稳定。对10个目的基因表达量标准化验证发现：以CNNM、GPR107为内参组合与选用4个基因作为内参组合无显著差异，相关系数可达0.999 9，且选用双内参组合比4个内参组合的可操作性强，而不适合的内参基因(PDP)会对RT-qPCR结果产生严重偏差。【结论】以CNNM、GPR107作为组合是山麦冬果实花青素生物合成研究的最佳内参基因。图6表5参39

• 单位
  浙江农林大学