山奈酚调控细胞衰老治疗类风湿性关节炎的体外研究

作者：先梦麟; 耿娜娜; 邓琳; 邝彪; 范梦恬; 郭风劲^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(12): 1281-1291.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202211155

• 山奈酚
• 类风湿性关节炎
• 网络药理学
• 分子对接
• 炎性衰老
• 衰老相关分泌表型

目的 基于网络药理学以及体外实验探讨山奈酚治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法 通过TCMSP及SwissTarget数据库查询山奈酚靶点，检索GeneCards和DisGeNET数据库，获得RA相关功能靶点。山奈酚与RA靶点通过Venny2.1.0交叉后，利用STRING数据库进行蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)分析，并对山奈酚和靶点进行分子对接。随后用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)与山奈酚处理小鼠单核细胞白血病细胞RAW264.7进行验证，分组为：Control组、LPS组、LPS+Kaempferol组。MTT法检测山奈酚对RAW264.7细胞毒性的影响。使用LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症细胞模型，检测各个处理组衰老和衰老相关炎症因子表达的影响。通过SA-β-Gal检测各组RAW264.7细胞β-半乳糖苷酶水平的变化。细胞免疫荧光检测各组IL-6的表达。结果 共得到138个山奈酚的作用靶点，山奈酚抗RA的潜在作用靶点76个。PPI分析结果显示TNF、EGFR、PTGS2、AKT1可能是山奈酚抗RA的核心靶点。分子对接结果表明，山奈酚与核心靶点TNF、EGFR、PTGS2、AKT1能形成较稳定的复合物。MTT结果证明，在24 h时，0.125～16μmol/L山奈酚对RAW264.7细胞增殖均具有促进作用(P<0.05)。在48 h时，0.125～8μmol/L山奈酚能够促进RAW264.7细胞增殖(P<0.05)。而72 h时，0.125～16μmol/L山奈酚对RAW264.7细胞增殖没有显著影响。qPCR和Westerm blot结果表明山奈酚能够降低LPS诱导的IL-1β、IL-6以及TNF-α的表达(P<0.05)。山奈酚也降低了细胞衰老标志基因p16和p21的表达，同时促进细胞周期标志物CCND1和CCNE1的表达(P<0.05)。免疫荧光结果表明山奈酚能够降低IL-6表达水平(P<0.05)。SA-β-Gal染色结果显示，LPS处理可以促进RAW264.7细胞β-半乳糖苷酶的水平(P<0.05),而山奈酚可以缓解LPS诱导的β-半乳糖苷酶水平增加(P<0.05)。结论 山奈酚可能通过调控炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α与p16/p21衰老相关基因，防止免疫细胞过早衰老，发挥治疗RA的作用。

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院; 重庆医科大学; 基础医学院