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摘要
目的探讨大黄素对早期糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法选取健康雄性SD大鼠40只, 按数字表法随机分为对照组10只和实验组30只。对照组大鼠实验过程中采用普通饲料喂养。实验组30只大鼠采用高糖、高脂饮食喂养4周后, 一次性腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg)的方法, 制备DN模型, 取造模成功的大鼠随机分为DN组和大黄素治疗组(DN+大黄素组)。造模成功后, DN组继续高糖、高脂饮食;DN+大黄素组给予高糖、高脂饮食, 联合大黄素(20 mg/kg)灌胃, 每天1次, 连续8周。各组大鼠在实验14周末观测以下指标:(1)收集24 h尿液, 测定24 h尿蛋白量;(2)完成尿液收集后称体质量并记录;(3)处死后取腹主动脉血检测肾肌酐、尿素氮、血糖;(4)取左侧肾脏, 苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸希夫染色(PAS)观察肾脏病理改变, 免疫组织化学染色观察Nephrin、Desmin蛋白的表达情况;(5)取右侧肾脏肾皮质部位组织, 电镜下观察足细胞及基底膜变化情况。结果实验组大鼠30只, DN大鼠模型造模成功24只, 实验过程中DN组及DN+大黄素组大鼠各死亡2只。(1)14周末对照组、DN组、DN+大黄素组大鼠体质量分别为(350.1±14.16)、(265.2±7.62)、(312.1±11.77)g, 差异有统计学意义(F=136.50, P<0.001)。(2)对照组肾肌酐、尿素氮、血糖、24 h尿蛋白分别为(28.88±4.36)μmol/L、(8.76±0.50)mmol/L、(9.81±0.86)mmol/L、(3.60±0.79)mg;DN组分别为(92.30±7.30)μmol/L、(29.41±6.67)mmol/L、(25.10±4.10)mmol/L、(35.23±4.07)mg;DN+大黄素组分别为(52.10±5.80)μmol/L、(14.93±1.03)mmol/L、(16.51±1.14)mmol/L、(13.35±1.89)mg。与对照组比较, DN组、DN+大黄素组肾肌酐、尿素氮、血糖、24 h尿蛋白量均升高;与DN组比较, DN+大黄素组各项指标均降低:差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(3)HE染色观察肾组织形态学:对照组肾小球及肾小管结构未见异常;DN组肾小球硬化, 肾小囊狭窄, 部分肾小管上皮细胞空泡变性;DN+大黄素组肾小球硬化及肾小囊狭窄均有改善。(4)PAS染色观察肾小球毛细血管袢、系膜基质变化情况:对照组肾小球毛细血管袢结构清晰可见, 系膜基质无异常;DN组肾小球毛细血管袢结构模糊, 系膜基质增多;DN+大黄素组肾小球毛细血管袢结构较模糊, 系膜基质较多。(5)免疫组织化学检测Nephrin及Desmin蛋白表达情况:与对照组比较, DN组、DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值均降低, Desmin蛋白光密度值均增加;与DN组比较, DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值增加, Desmin蛋白光密度值降低, 差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(6)透射电镜观察足细胞和基底膜变化情况:对照组足细胞轻度水肿, 足突均匀、等宽排列, 未见融合, 基底膜完整, 厚薄均一, 3层结构明显;DN组足细胞呈中度水肿, 足突明显融合、变宽, 基底膜厚薄均一, 3层结构明显;DN+大黄素组足细胞呈轻度水肿, 足突融合、变宽情况减轻, 基底膜厚薄均一。结论大黄素能显著改善早期DN大鼠的体质量、肾脏病理结构及功能, 其机制可能与抑制足细胞发生EMT、促进肾病蛋白Nephrin的表达和减少足细胞EMT骨架蛋白Desmin表达有关。
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