慢病毒感染稳定过表达A2bAR基因的大鼠少突胶质前体细胞系的建立

作者：陈小江; 孙金萍; 刘娟; 贺育青; 尚彤; 邵钰; 秦毅; 马全瑞

来源：神经解剖学杂志, 2017, 33(05): 549-554.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2017.05.007

• 腺苷受体A2b
• 少突胶质前体细胞
• 慢病毒
• 大鼠

目的:旨在构建稳定高表达腺苷受体A2b(adenosine recepbor A2b,A2b AR)的SD大鼠少突胶质前体细胞体系(oligodendrocyte precursor cells,OPC),用于进一步探讨OPC上A2b AR的相关功能。方法:取对数生长期的大鼠OPC,用携带A2b AR基因的慢病毒进行感染,嘌呤霉素进行筛选纯化,依照慢病毒载体中的荧光标签蛋白,通过荧光显微镜和Western Blot检测OPC上A2b AR的表达。结果:慢病毒感染后,具有绿色荧光的OPC细胞比例不足5%,在给予嘌呤霉素连续处理6 d后,具有荧光标记的OPC比例趋于稳定,去除嘌呤霉素的干预后,细胞增殖明显,经传代培养,具有荧光标记的OPC比例高于80%,Western Blot结果显示A2b AR的表达明显上调。获得较高纯度的携带A2b AR高表达基因的OPC,可以冻存、复苏以及传代。结论:采用携带A2b AR基因的慢病毒载体,可以成功感染SD大鼠OPC,构建高表达A2b AR的OPC体系,为A2b AR在髓鞘发育与修复等方面的研究奠定基础。

• 单位
  宁夏医科大学; 基础医学院; 宁夏医科大学总医院