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摘要
目的 优化青海血蜱重组Hq012蛋白（rHq012）包涵体的诱导表达和纯化条件。方法 从青海血蜱cDNA表达文库中克隆到1个在GenBank中无同源序列的新基因Hq012，构建原核表达质粒pET-30a-Hq012并转化大肠埃希菌感受态细胞[Escherichia coli Rosetta(DE3)]，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达rHq012。高压均质机裂解细菌，用6 mol/L盐酸胍溶解包涵体。比较先复性后纯化和先纯化后复性2种方法所得目的蛋白的产量。先复性后纯化即用稀释法复性后再用镍离子亲和层析法纯化蛋白；先纯化后复性即用镍离子亲和层析法纯化后再进行透析法复性。用12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行鉴定。结果 Hq012基因的核苷酸序列长度为759 bp，包含1个486 bp的开放阅读框，编码一个相对分子质量为18 500的蛋白质。诱导表达以浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导8 h蛋白表达量最高，包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解。与先纯化后复性相比，先复性后纯化收获的rHq012产量相对较高。镍离子亲和层析纯化后的蛋白质相对分子质量约为17 000，与预期的结果一致。结论 0.1 mmol/L IPTG诱导8 h是青海血蜱rHq012蛋白的最佳诱导条件，先复性后纯化的方法是蜱源重组蛋白rHq012更优的纯化方法，研究为包涵体蛋白的纯化提供了参考。
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单位鄂尔多斯市中心医院; 内蒙古医科大学
