基于Ti4+-IMAC富集的分枝菌酸小杆菌深度覆盖磷酸化蛋白质组研究

作者：蒙书红; 常蕾; 柳峰松^*; 徐平^*; 张瑶^*

来源：微生物学报, 2022, 62(10): 3768-3783.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20220070

• 分枝菌酸小杆菌
• 磷酸化蛋白质组
• TiO2
• 3+-NTA" name="keyword">Fe3+-NTA
• 4+-IMAC" name="keyword">Ti4+-IMAC

【目的】本研究以分枝菌酸小杆菌(Mycolicibacterium smegmatis)为研究对象，探索适于原核微生物理想的磷酸化富集方法。【方法】我们比较了二氧化钛(TiO2)、Fe3+-NTA和Ti4+螯合在磷酸酯修饰的固相微球(Ti4+-IMAC)3种不同富集方法磷酸化肽段的富集效率，并用不同分辨率的质谱仪评估富集稳定性。【结果】Ti4+-IMAC富集效率最高，磷酸化位点数是TiO2或Fe3+-NTA方法的7倍以上；TiO2和Fe3+-NTA方法富集到的磷酸化位点数相差不大，与已报道的用TiO2方法富集的磷酸化位点数目接近。Ti4+-IMAC富集结果稳定性很好，高分辨率Lumos质谱仪鉴定到的磷酸化位点数是Velos的2.6倍。【结论】本研究较高效地实现了分枝菌酸小杆菌磷酸化事件的鉴定，共鉴定到2 280个磷酸化蛋白、10 880个磷酸化肽段及4 433个可信磷酸化位点，有望用于其他微生物的磷酸化蛋白质组学研究。

• 单位
  北京蛋白质组研究中心; 生命科学学院; 蛋白质组学国家重点实验室; 河北大学; 中国医学科学院