蓝圆鲹骨骼肌内源性脯氨酸内肽酶抑制剂的纯化及其抑制机理

作者：钟婵; 谢雪琼; 孙乐常; 张凌晶; 刘光明; 曹敏杰^*

来源：食品科学, 2019, 40(24): 15-20.

• 蓝圆鲹
• 脯氨酸内肽酶
• 内源性抑制剂
• 抑制动力学
• 二级结构

对蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)骨骼肌采用热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose弱阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析和HiTrap Q HP强阴离子交换柱层析相结合方法,分离、纯化出一种内源性脯氨酸内肽酶抑制剂(prolyl endopeptidase inhibitor,PEPI)。研究了PEPI对脯氨酸内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)活性的影响及抑制机理。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明纯化的PEPI分子质量约为10 kDa,具有较强的热稳定性和酸碱耐受性,其为丝氨酸蛋白酶类PEP的专一性、可逆竞争型抑制剂,抑制常数Ki为0.34μmol/L。PEPI与PEP形成复合物后,α-螺旋、无规卷曲比例增加,β-折叠比例减少,PEP活性中心构象的改变是酶活力被抑制的主要原因。

• 单位
  食品与生物工程学院; 集美大学