视网膜发育基因Six3表达载体的构建

作者：孙雪荣; 葛坚; 章晓霜; 邓飞; 胡惠玲

来源：海南医学院学报, 2011, 17(03): 289-291.

DOI：CNKI:46-1049/R.20110329.1153.026

• Six3
• 视网膜
• pBaBb-puro
• 表达载体
• 鼠

目的:Six3在视网膜发育中起着关键性的调节作用,然而商品化的Six3表达载体尚鲜见,本研究拟以pBaBb-puro为骨架,构建Six3真核表达载体。方法:以新生乳鼠眼cDNA为模板,通过PCR扩增出Six3编码序列,经酶切后,用T4 DNA连接酶将其与pBaBb-puro进行连接,经过转化、筛选后,进行酶切和测序鉴定。结果:经RT-PCR扩增获得了含1002bp的Six3基因编码序列,经过酶切、连接、转化后,挑选12个菌落进行PCR检测,筛查到9个菌落含有重组质粒,对其中2个菌落进一步行酶切和测序鉴定,结果与理论预期完全相符。结论:成功构建了pBaBb-puro-Six3真核表达载体,为进一步研究Six3的功能奠定了基础。

• 单位
  岭南师范学院; 中山大学中山眼科中心; 眼科学国家重点实验室