人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

作者：吴春风; 马忠森; ***; 杨俊玲; 杨洋; 张越; 图们乌力吉; 乔俊华

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2007, (12): 1160-1162.

DOI：10.3321/j.issn:1007-8738.2007.12.020

• DcR3
• 原核表达
• 蛋白质纯化
• 多克隆抗体

目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a(+)/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果:pET28a(+)/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为33000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%。Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性。纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6。结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础。

• 单位
  吉林大学; 吉林省人民医院