土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

作者：张振华; 田拥军; 李磊; 王宝菊; 孟忠吉; 陆蒙吉; 杨东亮

来源：华中科技大学学报(医学版), 2007, 36(05): 567-570+577+556.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2007.05.002

• 土拨鼠肝炎病毒
• 核心蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体
• 抗原抗体交叉反应

目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 安徽医科大学第一附属医院