人细胞周期蛋白cyclin D_1基因RNAi表达载体的构建与鉴定

作者：于冬梅; 郝立君; 郭小英; 李颖; 罗赛

来源：中国肿瘤, 2007, (12): 1008-1011.

DOI：10.3969/j.issn.1004-0242.2007.12.014

• RNAi
• siRNA
• cyclinD1
• 载体构建

[目的]构建针对人细胞周期蛋白cyclinD1基因的RNAi真核表达载体,检测其对人卵巢癌HO-8910细胞cyclinD1基因表达的干扰效率。[方法]以cyclinD1为靶向设计,合成的4条互补寡核苷酸链克隆至pSUPER载体中,得到重组质粒pSUPER-C1￣4,行双酶切分析后测序鉴定;运用脂质体介导转染HO-8910细胞,G418筛选;采用RT-PCR检测对cyclinD1基因mRNA表达的干扰,并筛选有效的siRNA干扰序列。[结果]经酶切测序鉴定证实,重组质粒中已插入目的序列;RT-PCR表明有4个重组载体均不同程度抑制目的基因的转录,但以pSUPER-C2的干扰效率最强。[结论]在卵巢癌细胞系筛选出有效干扰cyclinD1基因表达siRNA序列,成功构建针对cyclinD1基因的RNAi真核表达载体有效抑制目的基因的表达。

• 单位
  哈尔滨医科大学附属第二医院