长片段融合PCR在构建烟曲霉rho1基因回补株中的应用

作者：韩改革; 贾晓东; 韩雪琳; 赵帅; 韩黎

来源：中国真菌学杂志, 2013, 8(03): 129-133.

• 融合PCR
• 烟曲霉
• rho1
• 基因回补

目的融合PCR是一种常用的构建重组片段或重组质粒的手段,但长片段融合PCR的难度较大。文中将探讨长片段融合PCR过程中引物设计及扩增条件对产物的影响。方法以构建烟曲霉rho 1基因回补株为例,采用融合PCR的方法扩增重组片段(长达6.5 kb),在引物设计时引入不同大小的同源区,并设置不同的扩增体系。结果当设计引物的同源区为35 bp,选用具有高扩增效率、高保真性的DNA聚合酶,以及各片段在融合PCR反应体系中的浓度为15 ng/μL时,实现了长达6.5 kb的片段扩增并完成了烟曲霉rho 1回补株的构建。结论在合适的PCR引物设计、片段浓度配比及聚合酶条件下,长片段融合PCR在丝状真菌的基因敲除及回补株的构建中是一种非常有效的工具。

• 单位
  中国人民解放军疾病预防控制所; 基础医学院; 中南大学